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產品簡介：

單細胞是非常重要的實驗材料，但是由于單細胞中的 RNA 很少，一個人體細胞只有 6 pg 的基因組 DNA，一個小鼠胚胎干細胞只有 2 萬多個mRNA 分子，一個小鼠成纖維細胞只有 50 萬個 mRNA 分子。因此單個細胞根本沒法用來進行核酸純化。為了克服次缺點，本公司開發了單細胞逆轉錄試劑盒。

產品特點：

1.直接用 1-500 個細胞進行逆轉錄，免去 RNA 純化過程中不可避免的

RNA 丟失。

2.得到的 cDNA 可以用于 RT 和 PCR 分離的兩步法 RT-PCR，方便用戶用珍貴的 cDNA 進行更多靶基因的后續染料法或探針法 qPCR 檢測。

3.所含 RNA 保護劑可有效抑制 RNA 的降解。

4.所含保護劑能有效克服痕量 RNA 因非特異性吸附產品的丟失。

5.本產品足夠進行 200 次 5 ?L 體系的單細胞裂解和 200 次 10 ?L 體系的逆轉錄。

6.本產品只能用于科研。

產品參數：

成份規格包裝

單細胞裂解液（RNA 專用）1 mL1.5 mL 本色蓋

5×單細胞 RT Buffer A400 ?L0.5 mL 白蓋管

5×單細胞 RT Buffer B400 ?L0.5 mL 綠蓋管

單細胞專用 MMLV100 ?L0.5 mL 紅蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

制備單細胞所需試劑

使用方法：

1.用戶需要根據樣本細胞種類選用合適的方法（如胰-酶消化）制備單細胞懸液，對已經處于單細胞懸浮狀態的細胞（如卵細胞），則可以跳過此步。本試劑盒不含相關試劑。

2.將 5.5 ?L 單細胞裂解液（RNA 專用）預先分裝到 0.2 mL PCR 管中或

96 孔板中，分裝的管數根據樣品數決定。

3.用流式細胞儀或在倒置顯微鏡下用液壓顯微操作器將 1-500 個細胞轉移到上步所得的、預裝了裂解液的PCR 管或 96 孔板中。

4.細胞進入裂解液后，裂解即發生。細胞裂解后在常溫最多只能放 5 小時。如果不需要立即使用，必須將樣品放-80℃長期保存。細胞裂解液可以 反復凍融最多 5 次。

5.如果立即使用，則在裂解樣品中加入 2 ?L 5×單細胞 RT Buffer A。

6.65℃保溫 5 分鐘后立即放冰上。

7.加入 2 ?L 5×單細胞 RT Buffer B。

8.加入 0.5 ?L 單細胞專用 MMLV，輕柔吹打混勻，總體系為 10 ?L。

9.在 PCR 儀上按下列參數進行逆轉錄反應：25℃保溫 5 分鐘，50℃保溫

60 分鐘，55℃保溫 15 分鐘，70℃保溫 15 分鐘。

10.所得 cDNA 可以直接用于后續PCR，也可以放-20℃長期保存。后續染料法 qPCR：本產品不含相關試劑，操作過程僅供參考。

11.加入 50 ?L 自備超純水到 10 ?L cDNA 中稀釋 cDNA。

12.取 3 ?L 上步所得 cDNA 稀釋液作為 PCR 模板，加入濃度為 4 ?M 的自備 PCR 引物各 1?L，加入 5?L 2×染料法PCR Mix，總體積為 10 ?L。

13.根據選定的 PCR 程序進行染料法 qPCR 并進行溶解曲線分析。

選擇我們的單細胞逆轉錄試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！