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產品簡介：

DNA 只存在于細胞核內，因此參與轉錄調節和 DNA 復制的蛋白質主要存在于細胞核中。要研究蛋白質與 DNA 的相互作用，首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細胞核蛋白質。目前、細胞核蛋白質制備方法一般都比較繁瑣，一次處理大量樣品時尤其不便，為此本公司基于溶脹法原理開發了本產品，用于從哺乳動物組織和培養細胞核蛋白的溫和微量提取。

產品特點：

1.提取制備過程簡便，只需要一小時。

2.實驗重復性好，尤其適合同時處理多個樣品。

3.可用于培養的動物細胞，也可以用于新鮮組織細胞。

4.提取步驟溫和，制備的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于轉錄因子活性分析、凝膠阻滯實驗(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、 DNA 足跡圖實驗、甲基化干擾實驗和酶活性測定等研究。

5.1E6 個細胞中可以得到 50-70 μg 的核蛋白質。

6.只適用于哺乳動物組織和培養細胞，不適用于植物和真菌等生物。

7.本產品足夠 50 次細胞核微量純化實驗。

8.細胞核-細胞漿蛋白提取試劑盒（溶脹法）只能用于科研。

產品參數：

名稱規格包裝

動物細胞溶脹液50 mL60 mL 本色瓶

動物細胞核溶脹液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

自備試劑

PMSF、DTT、PBS、胰-酶溶液等

使用方法：

實驗前準備：取適當量（根據樣品數量確定）的動物細胞溶脹液和動物細胞核溶脹液到新的塑料瓶中，置于冰上預冷，并在使用前數分鐘內同時向動物細胞溶脹液和動物細胞核溶脹液中加入自備的 PMSF 和 DTT，使 PMSF 的最終濃度為

0.2 mM，DTT 的最終濃度為 1 mM。實驗中所用試劑均需先預冷。一、提取培養細胞和懸浮細胞細胞核：

1.  培養細胞：將覆蓋率為 55-65%的培養細胞用自備的胰-酶溶液按標準的胰-酶法處理，然后刮到 1.5 mL 塑料離心管中，4℃ 600 g 離心 3 分鐘，小心

棄上清。細胞數量最好在 5E5-7 個。細胞沉淀體積約 0.1 mL。

2.懸浮細胞：直接將 5E5-7 個懸浮細胞轉移到 1.5 mL 塑料離心管中，4℃

600 g 離心 3 分鐘，小心棄上清。細胞沉淀體積約 0.1 mL。

3.用 1 mL 自備的預冷的 PBS 緩沖液重懸細胞沉淀，然后 4℃ 600 g 離心 3 分鐘，小心棄上清。注意：必須盡快用 PBS 緩沖液洗滌細胞沉淀，否則沉淀細胞產生的 CO2 將使局部 pH 減低產生毒性。

4.在細胞沉淀中加入 1 mL 預加了 PMSF 和 DTT 的動物細胞溶脹液，用手指輕柔彈管壁使細胞沉淀懸浮起來。最好不要用槍頭。

5.冰浴 10 分鐘。如果有條件可以取少量樣品涂片，在顯微鏡下觀察，90%的細胞將呈現氣球狀。如果沒有則繼續冰浴直到\90%的細胞呈現氣球狀。

6.渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。如果有 Dounce 玻璃勻漿器，也可以用預冷的勻漿器勻漿 10-12 次。如果有條件可以取少量樣品涂片，在顯微鏡下觀察，90%的細胞將破裂。如果未破裂細胞折光度高，并且沒有膨脹，則表示這些細胞已經死亡。如果這樣的細胞太多，則需要重新取樣。

7.4℃ 1000 g 離心 3 分鐘，小心棄上清。沉淀為細胞核，上清為胞漿成分， 如果需要可以留存上清。

8.在細胞核沉淀中加入 100 μL 預加了 PMSF 和 DTT 的、預冷的動物細胞核溶脹液，輕彈離心管混勻，使沉淀懸浮起來。

9.冰浴 20 分鐘。

10.4℃  1000 g 離心 2 分鐘，小心收集上清液（細胞核提取物），可立即用于后續的凝膠滯后實驗、BCA 法蛋白濃度測定、活性檢測、SDS-PAGE 電泳、2D 電泳等實驗，也可以分裝后放-70℃長期保存。

說明：本方法可以從 1E6 個細胞中得到 50-70 μg 的核蛋白質。二、對新鮮組織：

11.將 100-150 mg 新鮮組織置于培養皿中，用手術-剪將組織盡可能切成非常細小的碎片，盡量去除脂肪組織和結締組織等非目的組織，用自備的 PBS 緩沖液洗滌 2 次，離心后去上清。在組織沉淀中加入 400 μL 預加了 PMSF 和 DTT 的動物細胞溶脹液，在預冷的玻璃勻漿器內充分勻漿。勻漿需在冰浴或 4oC 進行。

12.勻漿后把勻漿液轉移到塑料離心管內，用手指彈管壁使沉淀懸浮起來，冰浴放置 10-20 分鐘，渦旋激烈震蕩 10 秒混勻。

13.接下來按照步驟 7-10 操作，即得到新鮮組織細胞核蛋白提取物。

選擇我們的細胞核-細胞漿蛋白提取試劑盒（溶脹法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！