目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 人端粒長度檢測試劑盒(染料法qPCR 法)
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50次 |
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貨號 | XY-D-1858 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | HumanTelomereLengthAssay(SYBRqPCR) |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產品簡介:
端粒(Telomere)是由多個重復核苷酸元件(TTAGGG)所串聯組成的一段真核細胞染色體末端的 DNA 序列,除了提供非轉錄 DNA 的緩沖物外,還能保護染色體末端免于融合和退化,保護染色體結構穩定和遺傳完整。端粒是一個人老化速度的最重要和準確的指標,它的初始長度由遺傳和環境因素決定,并且會隨著時間的推移而減少。有研究表明,端粒長度與 DNA 修復、衰老、細胞凋亡及腫瘤發生等有密切的聯系,因此,對于研究人員來說,準確而可重復地測量端粒長度尤為重要。本產品主要采用相對定量 qPCR 來直接比較樣本的平均端粒長度,即采用端粒重復序列(Tel)的拷貝數與基因組單拷貝基因(SCR)的拷貝數比值(T/S)作為端粒相對長度。單拷貝基因引物(SCR)特異性識別并擴增人類 11 號染色體上 78bp 長的區域。
產品特點:
1.即開即用,用戶只需要提供外周血 DNA 模板。
2.操作只需要半天,比 Southern 雜交檢測法快 3-5 天時間。
3.無非特異性擴增。每組引物均已經過擴增曲線效率驗證( E>98%, R2>0.99),熔解曲線分析以及凝膠電泳驗證。
4.使用 PCR 擴增,幾乎每個分子生物學實驗都有相關設備,非常方便。
5.本產品足夠 100 次/50 樣的染料法熒光定量 PCR 反應。
6.人端粒長度檢測試劑盒(染料法qPCR 法)只能用于科研。
產品參數:
成分規格包裝
2×染料法qPCR MasterMix1mL1.5mL 離心管
50× Rox 染料250uL1.5mL 棕色管
超純水1mL1.5mL 離心管
端粒基因引物 (10uM)50uL1.5mL 離心管
單拷貝基因引物 (10uM)50uL1.5mL 離心管
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。
自備試劑
基因組 DNA:在 20μL 體系里可使用 0.5ng 至 5ng 量的基因組 DNA。
使用方法:
一、反應體系
建立如下所述的反應體系。若要進行多個反應,可制備通用組分的預混液,在每 管或每 孔中加入合適的體積,然后加入特殊的反應組分(例如 :模板)。
1.推薦使用 20μL 體系以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
2.蓋上或密封反應管/PCR 板 ,輕輕混勻。可以稍微離心 ,確保所有組分都在管底。
3.將反應體系置于熒光定量 PCR 儀中 ,收集數據并分析結果。按下表所示設置您的 PCR 儀。最適溫度 和孵育時間可視具體情形而定。
*ROX 染 料
可根據選擇的儀器在反應體系中加入 ROX 染料 , 將反應體系中的熒光信號標準化。下表所列為使用 不同儀器操作時所需的 ROX 量(每 50µL 反應體系):
三步法擴增程序:
階段循環數溫度時間
預變性1x95℃1min
變性
35-40x95℃10 sec
退火55℃30 sec
延伸72℃45 sec
熔解曲線 (Melt Curve)
注:決定最佳退火溫度的主要因素為引物長度及引物堿基組成。根據試劑盒 端粒及 SCR 引物組的特性 ,我們建議退火溫度設置為 55℃。
結果分析
定量實驗至少需要三個生物學重復。反應結束后需要確認擴增曲線及熔解曲線。
使用的 2^-ΔΔCt 法 (Livak 法)進行的計算 得到 T/S 的比值作為端粒的相對長度
選擇我們的人端粒長度檢測試劑盒(染料法qPCR 法),就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!