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產品簡介：

本產品利用酶法對 DNA 進行片段化。

產品特點：

1.即開即用，用戶不用單獨購買各種成分并進行優化。

2.操作簡便省時，只需要在樣本中加入片段化酶，再反應一段時間即可。

3.跟后續的高通測序（NGS）兼容。

4.安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

5.性價比高。

6.本產品足夠 20 次 DNA 片段化反應。

7.DNA 片段化試劑盒（酶法）只能用于科研。

產品參數：

成份規格包裝

片段化酶 120μL0.5mL 紅蓋管

片段化酶 1 稀釋液1040μL1.5mL 綠蓋管

DNA 片段化溶液 A20μL0.5mL 白蓋管

DNA 片段化溶液 B50μL0.5mL 白蓋管

DNA 片段化反應終止液400μL0.5mL 本色管

150 mM MgCl2 溶液40μL0.5mL 本色管

片段化酶 2 稀釋液200μL0.5mL 綠蓋管

片段化酶 220μL0.5mL 紅蓋管

DNA 級 EDTA 溶液50μL0.5mL 本色管

超純水1mL×101mL 藍蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

電泳上樣緩沖液，推薦使用 Orange G 作為電泳示蹤劑，因為溴酚藍（BPB）和

二甲苯青（Xylene Cyanol）與 DNA 片段重疊，應避開使用。

使用方法：

一、基因組 DNA 片段化反應

1.確定反應體積。

2.基因組 DNA 在 100ng 以下使用 10μL 反應體系；基因組 DNA 在 100ng～ 1μg 之間使用 20μL 反應體系。注意：基因組 DNA 超過 1μg 時，以 1μg/20 μL 的反應體系增加反應管數或擴大反應體系，很好地為 5μg/100μL。

3.將 2 臺 Thermal Cycler PCR 儀的溫度分別設定為 16℃和 70℃。只有 1 臺

儀器時設定為 16℃。

4.在冰上將基因組 DNA 以外的下列試劑添加到 0.2mL 反應管中，配制混合液，充分混勻后再加入基因組 DNA。用移液槍輕輕吸打或用手輕彈管壁，離心后使用，避免產生氣泡，不能使用振蕩器混勻。

注意：以上為基因組 DNA 1μg/20μL 反應體系；如果基因組 DNA 量少，那么要調整為適合的體系。

5.片段化酶 1 的稀釋（使用前新鮮調制）。稀釋方法如下：在冰上按下列順序在1.5mL 反應管中加入 450μL 超純水和 50μL 片段化酶 1 稀釋液，充分混勻。輕輕振蕩離心。將 1μL 的片段化酶 1 加入到配好的混合液中，然后將 200μL的移液槍調到 100μL 刻度后，輕輕吸打 10 次左右，避免產生氣泡。再上下顛倒混勻（5 次以下），離心。不能使用振蕩器混勻。注意：稀釋后的片段化酶 1 請在 10 分鐘內使用，不能保存。

6.確認 Thermal Cycler PCR 儀的溫度在 16℃后，將 1μL 稀釋后的片段化酶 1添加到上述加入基因組 DNA 的混合液中。吸打數次后，立即在 16℃條件下進行反應。推薦反應時間 5-8 分鐘。注意：在冰上進行試劑添加和混勻的操作。

7.不要移動反應管，在 Thermal Cycler PCR 儀上直接加入 20μL 的 DNA 片段化反應終止液終止反應。用移液槍吸打 2-3 次后，再轉移到冰上吸打數次。

8.確認 Thermal Cycler PCR 儀溫度為 70℃后，將吹打后溶液的 0.2mL 反應管轉移到 PCR 儀上。

9.70℃反應 5 分鐘后，轉移到冰上。注意：在冰上放置 2 分鐘以上。

10.只進行 DNA 片段化反應時，在冰上放置后的 0.2mL 反應管中加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液，用移液槍吸打，充分混勻后，進行 DNA 片段的精制。

二、末端平滑化反應

11.將兩臺擴增儀分別設定為 16℃和 70℃。如果只有一臺，則設定為 16℃。

12.片段化酶 2 的稀釋（使用前調制）。稀釋方法：在冰上準備 0.2mL 反應管，試劑按下述的比例（片段化酶 2 稀釋液:片段化酶 2=9:1）配成混合液后，輕輕吸打，充分混勻，避免產生氣泡。

13.在在冰上放置后的 0.2mL 反應管中加入 2μL 的 150mM MgCl2 溶液，移液槍吸打，充分混勻，避免產生氣泡。不能使用振蕩器混勻。

14.將 2μL 稀釋后的片段化酶 2 添加到 0.2mL 反應管中，吸打數次混勻后，立即在 16℃反應 10 分鐘。注意：此步操作在冰上進行。

15.反應結束后，把 0.2mL 反應管轉移到冰上。只有一臺擴增儀時，把溫度調至 70℃。

16.加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液，充分吸打混勻后離心。

17.確認 Thermal Cycler PCR 儀設定的溫度為 70℃后，將 0.2mL 反應管轉移到 Thermal Cycler PCR 儀上反應 5 分鐘。

18.將 0.2mL 反應管轉移到冰上。

19.片段化 DNA 的確認：取相當于 200～250ng 量基因組 DNA（在冰上放置后） 的反應液約 10μL 進行 1.5%瓊脂糖凝膠電泳。

選擇我們的DNA 片段化試劑盒（酶法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！