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產品簡介：

本試劑盒是用于質粒 DNA 大量制備與純化的試劑盒。菌體先經堿裂解法處理，再通過離心吸附柱，專一結合 DNA，最后洗去雜質，高效快速提取質粒 DNA， 全套操作可以在 30 分鐘之內完成。使用本試劑盒可從 50-100 mL 過夜培養的菌液純化得到高達 300-500 ug 的高純度質粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉化、測序及 PCR 等。

產品特點：

1.快速、步驟少，整個操作在半個小時之內完成。

2.純度高，采用本試劑盒提取的質粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間。

3.產量高，每毫升過夜培養的細菌可以提取到 2-5 ug/mL。

4.用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質粒。

5.本產品足夠 5 次質粒 DNA 大量純化。

6.質粒 DNA 大量純化試劑盒（過柱法）只可用于科研。

產品參數：

成份規格包裝

質粒 DNA 大量純化溶液 A26 mL30 mL 本色瓶

質粒 DNA 大量純化溶液 B26 mL30 mL 本色瓶

質粒 DNA 大量純化溶液 C36 mL60 mL 本色瓶

RNase A 溶液（10mg/mL）0.6 mL1.5 mL 本色管

DNA 離心吸附柱（大提）

5 套塑料袋

通用洗柱液100 mL120 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化專用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運輸及保存

常溫運輸和保存，其中 RNase A 溶液需要低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

50 mL 塑料離心管

使用方法：

1.用 250 mL 離心管收集 100-300 mL 菌液，5000 rpm 離心 10 分鐘，去除上清。

2.往細菌沉淀中加入 5 mL 質粒 DNA 大量純化溶液 A，充分振蕩懸浮（第一次使用時需要將 RNase A 溶液全部加入到溶液 A 中并混合均勻，未用完的、含RNase A 的溶液 A 需放 4℃保存）。注意：充分重懸細胞沉淀使之無細胞結塊狀物對于獲得高的質粒產量十分重要。

3.加入 5 mL 質粒 DNA 大量純化溶液 B，溫和翻轉 10 余次至藍色變得均勻。

室溫放置 5-10 分鐘裂解細菌。注意：避免劇烈振蕩，否則細菌基因組 DNA

將斷裂為小片段，與質粒難以分離，污染質粒 DNA。質粒 DNA 大量純化溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸， 中和質粒 DNA 大量純化溶液 B 中的堿，降低其效率。如果質粒 DNA 大量純化溶液 B 顏色不是藍色，則表示變質，應該棄之不用并且速跟廠家聯系。

4.加入冰浴的 7 mL 質粒 DNA 大量純化溶液 C，顛倒混勻，此時混合液應該從藍色變成無色，如果不發生顏色變化，則表示質粒 DNA 大量純化溶液 C 變質，需要聯系廠家。將混合液冰上放置 10 分鐘，將有白色絮狀物形成。注意不要過分振蕩。

5.6000 rpm 離心 10 分鐘。如果離心管承受能力強，離心速度還可以適當提高以充分沉淀絮狀物。

6.將上清液（約 20 mL）轉移到 DNA 離心吸附柱（大提）中，放入 50 mL 套管中。由于此時的溶液比重較大，部分沉淀物懸浮在上清液中屬正常，吸取上清時避開漂浮的沉淀物即可。

7.6000 rpm 離心 5 分鐘，質粒 DNA 將與 DNA 離心吸附柱（大提）中的膜結合，棄穿透液。

8.將 10 mL 通用洗柱液加入到 DNA 離心吸附柱（大提）中，室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm 離心 5 分鐘，棄穿透液。

9.重復上步一次，即將 10 mL 通用洗柱液加入到 DNA 離心吸附柱（大提）中， 室溫靜置 2 分鐘后 6000 rpm 離心 5 分鐘，棄穿透液。

10.室溫 6000 rpm 空甩 5 分鐘，棄穿透液。注意：此步對去除殘留通用洗柱液很重要，否則通用洗柱液會影響 DNA 的使用。

11.將 DNA 離心吸附柱（大提）放入一個自備的、干凈的 50 mL 塑料離心管中， 加 0.5 mL DNA 洗脫液（洗脫液如加熱到 50-65℃效果更佳），室溫靜置 2 分鐘后 6000rpm 離心 5 分鐘，收集液即是質粒 DNA 溶液。

12.本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強，所以再用 1 mL DNA 洗脫液洗脫3-4 次才能把絕大部分質粒 DNA 洗脫下來。得到的 DNA 可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果 DNA 洗脫液不夠，可以用自備的 DEPC 水代替。注：一般情況下，第一次洗脫可以洗脫約 25%的質粒 DNA；第二次洗脫可以洗脫約 35%的質粒 DNA；第三次洗脫可以洗脫約 20%的質粒DNA；第四次洗脫可以洗脫約 10%的質粒 DNA；第五次洗脫可以洗脫約 8% 的質粒 DNA。

13.合并所得質粒 DNA，立即使用或-20℃儲存。如果需要使用液相內毒素清除劑清除質粒 DNA 中的內毒素，可以直接將此步所得的 DNA 溶液用于去內毒素處理。如果 DNA 濃度太低，可以另購本公司的核酸濃縮劑進行濃縮。

選擇我們的質粒 DNA 大量純化試劑盒（過柱法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！