目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 乳酸乳球菌電轉感受態細胞制備試劑盒
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 20次 |
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貨號 | XY-D-1881 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | Lacotococcus lactis Electrocompetent Cell Preparat |
保存條件 | 常溫 | 有效期 | 1年 |
產品簡介:
本產品是用于制備乳酸乳球菌電轉感受態細胞的試劑盒。
產品特點:
1.操作簡單,即開即用,用戶不需要花時間優化條件。
2.制備得到的電轉感受態細胞可以-80℃保存一年,方便多次使用,免去每次轉化都要新鮮制備感受態細胞。
3.主要用于乳酸乳球菌,但能否用于其他乳球菌不詳。
4.最高轉化效率可達到 2×10E7 個轉化子/?g 質粒 DNA,但實際效率跟質粒長度、質粒濃度、恢復培養基等多種因素相關。
5.得到的電轉感受態細胞可以用各種穿梭質粒 DNA 進行電轉化。
6.本試劑盒足夠制備 20 次,共 200 管乳酸乳球菌電轉感受態細胞(每管 70 μL)。
7.乳酸乳球菌電轉感受態細胞制備試劑盒只能用于科研。
產品參數:
成份規格包裝
乳酸乳球菌電轉感受態細胞制備溶液 A50 mL×360 mL 本色瓶
乳酸乳球菌電轉感受態細胞制備溶液 B50 mL60 mL 本色瓶
乳酸乳球菌電轉感受態細胞制備溶液 C30 mL30 mL 本色瓶
使用手冊1 份無
運輸及保存
常溫運輸和保存,有效期一年。
自備試劑
GM17 液體培養基、含 0.5 M 蔗糖和 1%甘-氨酸的 GM17 液體培養基、恢復培養基(含2 mM CaCl2 和 20 mM MgCl2 的 GM17 液體培養基)、600 nm 分光光度計、電轉儀。
使用方法:
一:電感受態細胞的制備
1.挑取平板劃線后培養得到的新鮮單菌落,接種到5 mL 自備的GM17 液體培養基中。
30℃靜置厭氧培養 12-16 小時。
2.轉移 2.5 mL 上步所得培養菌液到 50 mL 自備的 GM17 液體培養基中。30℃靜置厭氧培養 12-16 小時。
3.轉移 4 mL 上步所得培養菌液到自備的 250 mL 含 0.5 M 蔗糖和 2.5%甘氨-酸的GM17 液體培養基中,30℃靜置厭氧培養直到 OD600 達到 0.5-0.8 之間。
4.將培養物轉移到無菌離心管中 6000 rpm 10 分鐘,棄上清。離心時將洗滌液 B 和洗滌液 C 放冰上預冷待用。
5.加入 7 mL 的溶液 A 重懸細菌。此時細菌的濃度約為 1×10E9 個/mL。
6.重懸后室溫放置 30 分鐘,4℃ 6000 rpm 10 分鐘,棄上清。室溫放置 30 分鐘很重要,不能跳過。
7.加入 1.5 mL 預冷的溶液B 重懸細菌,然后 4℃ 6000 rpm 10 分鐘,棄上清。
8.再加入 1.5 mL 預冷的溶液 C 重懸細菌,然后 4℃ 6000 rpm 10 分鐘,棄上清。
9.再加入 0.7 mL 預冷的溶液B 重懸細菌,按每管 70 L 分裝到 1.5-2.0 mL 的離心管中,此時細菌的濃度約為 1×10E10/mL,共得 10 管電感受態細胞。
10.將感受態細胞全部放入-80℃冰箱待用。注意:不能放在液氮中,否則將喪失電轉化能力。
二:電轉化乳酸乳球菌感受態細胞(本試劑盒不含相關試劑)
11.將裝有 70 μL 感受態細胞的冷凍管從冰箱取出的、放置在 30℃水浴中快速化凍(快速化凍的效果好于緩慢化凍)。
12.加入 500 ng 左右質粒 DNA 并輕柔混勻。
13.迅速轉移到預冷的、距離為 0.2 cm 的電擊杯中。
14.按電擊儀的手冊設置電擊參數并進行電擊處理,參考條件為:12.5 kV/cm (對 0.2 cm 的電擊杯,則為 2.5 kV,200 ?,25 μF,相當于脈沖長度為 4 ms)。各廠家電轉儀器的使用略有不同,請嚴格按電擊儀廠家提供的手冊進行操作。注意:如果爆杯,可能原因一是樣品含有氣泡,可在加樣時注意避免或稍靜置一會兒再電轉; 二是電轉杯未清洗干凈、有雜質或老化,可重新清洗或更換電轉杯;三是樣品含鹽量較高,可在第 9 步重懸后,離心棄上清并再次用 B 溶液重懸再進行后續操作;四是電壓過高,可將電壓調整至 2.0 kV,再次嘗試。
15.電擊后迅速將細胞和 1 mL 預冷的恢復培養基(配方見自備物品)輕柔混勻,再轉移到 1.5 mL 的塑料離心管中,30℃靜置厭氧培養 2 小時。
16.取 0.2 mL 涂盤于含相應抗菌素(由質粒的抗性基因決定)的 GM17 平板上,30℃ 厭氧培養 1-2 天。
17.觀察并記錄轉化子,計算轉化效率,并進行后續實驗。
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