土壤FDA水解酶活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC0480

規格：50T/24S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑二：臨用前取1支加1.5 mL丙酮溶解，用不完的-20℃分裝保存一周，避免反復凍融；

2、 標準品：10 mg熒光素，臨用前加入3.03 mL 50%丙酮（丙酮（V）：蒸餾水（V）=1:1）配成10 μmol/mL的熒光素標準溶液，可45℃水浴促進溶解，-20℃分裝保存兩周，避免反復凍融。

產品說明：

FDA水解反應能很好的反應土壤中微生物活性和土壤質量的變化以及生態系統中有機質的轉化，是土壤質量研究中的重要生物學指標之一。

FDA是一種無色化合物，在介質中能被許多土壤酶所催化水解，并經脫水反應，產生酶解終產物熒光素，穩定不易被分解，并在490nm處有強吸收峰，通過檢測490nm處的吸光值變化可計算得FDA水解酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、天平、臺式離心機、恒溫水浴鍋/恒溫培養箱、丙酮（不可快遞）、研缽、30-50目篩。

三、FDA水解酶活性計算

酶活性定義：每克土壤每天產生1μmol 熒光素的量為一個酶活力單位。

FDA活性（U/g 土樣）=（ΔA測定÷ΔA標準×C標準品）×V反總÷W ÷T=48×（ΔA測定÷ΔA標準）÷W

C標準品：標準品濃度 2μmol/mL；V反總：反應總體積，1mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，1h=1/24d。

注意事項：

1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣本，否則很難準確反映酶的活性。

2. 測定之前進行預實驗，若吸光值大于1.2，可適當減少土樣質量再測定。若吸光值過小，可增加土樣質量或增加反應時間來進行測定。

實驗實例：

1、 分別取兩管0.1g三葉草土于1.5mLEP管中，分別為對照管及測定管，按照測定步驟操作，取上清稀釋5倍進行測定，用1mL玻璃比色皿測定吸光值，計算ΔA測定=A測定-A對照=1.148-0.066=1.082，ΔA標準=A標準-A空白=0.499-0=0.499，按土壤質量計算酶活得：

FDA活性（U/g 土樣）=48×（ΔA測定÷ΔA標準）÷W×5（稀釋倍數）= 5204.01 U/g 土樣。

2、 分別取兩管0.1g林土于1.5mLEP管中，分別為對照管及測定管，按照測定步驟操作，取上清稀釋5倍進行測定，用1mL玻璃比色皿測定吸光值，計算ΔA測定= A測定-A對照=0.973-0.133=0.84，ΔA標準=A標準-A空白=0.499-0=0.499，按土壤質量計算酶活得：

FDA活性（U/g 土樣）=48×（ΔA測定÷ΔA標準）÷W×5（稀釋倍數）= 4040.08 U/g 土樣。

參考文獻：

[1] Sánchez-Monedero M A, Mondini C, Cayuela M L, et al. Fluorescein diacetate hydrolysis, respiration and microbial biomass in freshly amended soils[J]. Biology and Fertility of Soils, 2008, 44(6): 885-890.

[2] Paudel B R, Udawatta R P, Anderson S H. Agroforestry and grass buffer effects on soil quality parameters for grazed pasture and row-crop systems[J]. Applied Soil Ecology, 2011, 48(2): 125-132.

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