杭州譜育科技發展有限公司
動物毛發快速篩查新技術,LC-MS/MS法監測動物毛發瘦肉精殘留
檢測樣品:動物毛發
檢測項目:瘦肉精
方案概述:本文建立了使用超高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜測定動物毛發中“瘦肉精”殘留的快速且高靈敏度的分析方法,為食品安全檢測提供有效技術支持。
2021年央視3·15晚會,報道了河北省青縣養殖戶在養羊過程中,為了增加出肉率,在飼料中偷偷混入瘦肉精的情況。據統計,我國近十年瘦肉精相關事件及通報幾十起,幾乎每年都能檢測出含有“瘦肉精”的肉類及其制品。“瘦肉精”主要是一類叫做腎上腺素受體激動劑的物質,包括克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A等物質,在養殖過程中使用,可以促進動物機制的新陳代謝,降低骨骼肌脂肪,增加瘦肉率并改善肉質色澤,長期食用殘留瘦肉精的畜禽肉,藥物在體內積蓄到一定程度時,會引起各種不良反應,如心律失常、過敏性丘疹、嘔吐等,嚴重還可能誘發冠心病、高血壓,甚至惡性腫瘤。我國已明令禁止在牲畜喂養過程中使用任何瘦肉精。
瘦肉精在毛發中的殘留時間很長,停用12周以上仍能夠被檢測,農業農村部據此制定了利用動物毛發樣品檢測瘦肉精的技術標準。2022年9月,農業農村部正式頒布公告,發布并開始實施《動物毛發中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A的測定》檢測方法,用于檢測動物毛發中瘦肉精殘留量。高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜法測定瘦肉精具有高靈敏性、操作簡便、分析自動化、節省時間、重現性好、效率成本比價高、假陽性率低等優點。本應用中心參考以上標準,建立了使用超高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜測定動物毛發中“瘦肉精”殘留的快速且高靈敏度的分析方法,為食品安全檢測提供有效技術支持。
關鍵詞:LC-MS/MS、食品、養殖、動物毛發、瘦肉精、農業農村部公告 第600號
實驗部分
儀器
表1 液相色譜串聯三重四級桿質譜儀
表2 液相色譜串聯三重四級桿質譜儀檢測參數
試劑及標準品
試劑:質譜級甲酸(CNW)、色譜級甲醇(Merck)、色譜純乙腈(Merck);檸檬酸鈉、氯化鈉、乙酸鈉(國藥集團);氨水(CNW);十二烷基磺酸鈉(阿拉丁)
純水:18.2 MΩ·cm去離子水(25℃);
標準品:克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A客戶提供;內標克侖特羅-D9、萊克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3和苯乙醇胺A-D3均購自阿爾塔。
樣品前處理
參考農業農村部公告第600號,具體前處理步驟如下:
樣品制備:
選取動物背部毛發,根部剪斷,保存備用。取適量毛發加入燒杯中,加入十二烷基磺酸鈉溶液,于超聲清洗器上超聲清洗30 min,水洗凈毛發,40 ℃電熱干燥箱中烘干,烘干后將其制成粉末。
樣品前處理:
稱取試樣于離心管中,加入混合內標工作溶液,0.1 mol/L鹽酸,渦旋混勻,于60 ℃水浴中水解4 h,7000 r/min離心10 min,取上清液備用。固相萃取柱依次用少許甲醇,水預洗,取全部備用液過柱,依次用少許水,甲醇淋洗,抽干,用5%氨水甲醇溶劑洗脫,收集洗脫液,于50 ℃氮吹吹干,用0.1%甲酸乙腈溶液溶解,過0.22 um濾膜,供液相色譜-串聯質譜儀測定。
測試結果
靈敏度
精密稱取混合標準工作溶液和混合內標工作溶液適量,用0.1%甲酸乙腈溶解并定量稀釋成濃度為0.50 ng/mL的溶液,測試各化合物信噪比(峰-峰)。
表1 各化合物信噪比
圖2 各化合物信噪比結果
樣品測試結果
動物毛發樣品經過2.6前處理后測試結果如下所示。
表2 動物毛發樣品測試結果
*ND=Not Detected
表3 動物毛發樣品測試結果
加標回收率結果
在試樣中分別加入100 ng/mL的混合標準工作液10 uL、25 uL、50 uL,按照3.6前處理方法進行樣品處理,測試結果如下所示。沙丁胺醇加標回收率在86.20%-103.11%,萊克多巴胺加標回收率在80.64%-117.28%,克侖特羅加標回收率在81.93%-109.23%,苯乙醇胺A加標回收率在71.83%-98.40%。
表4 各化合物加標回收率測試結果
結語
本文使用LC-MS/MS對動物毛發中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量進行檢測,考察方法的線性、靈敏度、穩定性、加標回收率。各化合物線性系數大于0.998;0.5 ng/mL的標準物質溶液信噪比(峰-峰)均大于27;標準溶液在濃度為1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL和10 ng/mL時連續6次進樣,保留時間RSD不超過0.16%,相對峰面積RSD均小于10%;各化合物在100 ng/mL濃度水平的加標回收率在80%~120%之間。以上結果表明,該方法靈敏度高,精密度良好,滿足農業農村部關于動物毛發中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量測定的要求。
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附錄
設備與耗材方案
一、EXPEC 5210配置詳情
二、標準品
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